پایگاه علمی سعید سان دانلود رایگان مقالات علمی کنفرانس و ژورنال
(پایان نامه ارائه شده به تحصیلات تکمیلی دانشگاه علوم پزشکی شیرازبه عنوان بخشی از فعالیت های تحصیلی لازم برای اخذ درجه کارشناسی ارشد)
دررشته ی: سمشناسی (گروه سم شناسی دانشکده داروسازی شیراز) (شیراز- ایران)
خلاصه:
انار به عنوان یک میوه پر مصرف در ایران و سایر کشورهای جهان استقسمت مورد استفاده درخت انار , گل , برگ, پوست شاخه های جوان و ریشه، پوست میوه, آب انار و عصاره تغلیظ شده آن است. آب میوه ی آن جهت درمان و پیشگیری از بیماری های کبدی در ایران استفاده می شود. در این تحقیق اثرات غلظت های مختلف عصاره های هیدروالکلی، اتیل استاتی و اِن هگزانی از آب میوه و هسته انار )پونیکاگراناتوم) در مقابل سمیت القا ِ شده توسط تتراکلرید کربندر سلول های HepG2 مورد بررسی قرار گرفت. یک ساعت قبل از اضافه کردن mM 100تتراکلرید کربن غلظتهای µg/ml 10000 و ۱۰۰۰ و ۱۰۰ و ۱۰ و ۱ از عصاره ها به سوسپانسیون سلول ها اضافه شدند. بعد از ۲۴ ساعت جهت بررسی سمیت سلولی همچنین سطح سلولی TBARs و محتوای GSH اندازه گیری شدند.
عصاره هیدروالکلی و اتیل استاتی آب میوه انار در غلظت های µg/ml100 و µg/ml 1000 در مقابل سمیت القا شده توسط تتراکلرید کربن اثر محافظتی داشتند و اتیل استاتی نیز بهتر از هیدروالکلی بود اما عصاره هیدروالکلی هسته اثر محافظتی بهتری نسبت به اتیل استاتی داشت و عصاره ان هگزانی آب و هسته میوه نیز در هیچکدام از غلظت های بکار رفته اثر محافظتی نداشتند. عصاره های انار به تنهایی در غلظت های پایین تر از ۱ میلی گرم اثر سمی نداشتند. بنابراین نتایج بدست آمده در این تحقیق حاکی از تایید استفاده سنتی از انار(پونیکا گراناتوم) بعنوان یک ترکیب محافظ کبدی است.
کلمات کلیدی: پونیکا گراناتوم، حفاظت کبدی، سلول هایHepG2
فهرست مطالب:
فصل اول: مقدمه
-هدف و انگیزه
۱ـ۱ـ کب
۱ـ۱ـ۱ـ آناتومی
۲ـ۱ـ۱ـ بافت شناسی
۳ـ۱ـ۱ـ فیزیولوژی و کارکردکبدپ
۴ـ۱ـ۱ـ بیماری‌های کبد
۱ـ۴ـ۱ـ۱ـ هپاتیت سمی و هپاتیت ناشی از داروها
۵-۱-۱- تتراکلریدکربن
۱-۵-۱-۱- مشخصات فیزیک ىوشیمیایی
۲-۵-۱-۱-مکانیسم سمیت تتراکلرید کربن
۳-۵-۱-۱- علائم مسمومیت با تتراکلرید کربن
۶-۱-۱- آسیب‌های سلول کبدی
۱-۶-۱-۱- پراکسیداسیون چربی
۲-۶-۱-۱- قوانین شیمی لیپیدپراکسیداسیون
۳-۶-۱-۱- مراحل شروع و پیشرفت روند لیپیدپراکسیداسیون
۴-۶-۱-۱- سیستم حفاظتی سلول در برابر لیپید پراکسیداسیون
۵-۶-۱-۱-تخلیه گلوتاتیونی و استرس اکسیداتیو
۶-۶-۱-۱- اندازه گیری گلوتاتیون سلولی
۷-۱-۱-آنزیم‌های آنتی اکسیدان
۱-۷-۱-۱- سوپر اکسید دسیموتاز
۲-۷-۱-۱- کاتالاز
۳-۷-۱-۱-گلوتاتیون پراکسیداز
۸-۱-۱- سیلیمارین
۱-۸-۱-۱-ساختار سیلیمارین
۲-۸-۱-۱- مکانیسم عمل سیلیمارین
۱-۲-۱- انار
۲-۲-۱-انواع گونه های انار و پراکندگی آن
۱-۲-۲-۱- ترکیبات شیمیاییانار
۳-۲-۱- کاربرد های درمانی انار
۱-۳-۲-۱- برگ درخت انار
۲-۳-۲-۱- پوست درخت انار
۳-۳-۲-۱- دانه انار
۴-۳-۲-۱-آب انار
۱-۳-۱- سلول های HepG2
۲-۳-۱- سلول های سرطانی کبد Liver cell lines
فصل دوم: مواد، دستگاهها و روشها
۱-۲- مواد
۲-۲- دستگاه ها
۳-۲- وسایل
۴-۲- روش ها…….
۱-۴-۲-تهیه عصاره آب انار
۲-۱-۴-۲-استخراج عصاره هسته انار
۳-۱-۴-۲-تعیین غلظت سمی عصاره آب و هسته میوه انار
۲-۴-۲-تهیه محلول استوک
۵-۲-روش تهیه محلولهاو بافرهای مورداستفاده
۱-۵-۲-تهیه بافر فسفاته نمکی یا PBS (M 5/0 ,2/7pH=)
۲-۵-۲- محلول ۲۰٪تری کلرو استیک اسید
۳-۵-۲- محلول تیوباربیتوریک اسید
۴-۵-۲- محلول DTNB
۶-۲- تهیه مواد لازم جهت کشت سلول
۱-۶-۲- تهیه محلول استوک Trypsin و رقیق سازی آن
۲-۶-۲- تهیه محلول استوکTrypsin (0.25%) –EDTA (1mM)
۳-۶-۲- محیط کشت
۴-۶-۲- تهیه محیط کشت حاوی ۱۰% سرم جنین گاو
۵-۶-۲- تهیه محیط انجماد سلولها
۷-۲- چگونگی کشت سلول
۱-۷-۲- در آوردن سلولها از تانک نیتروژن مایع
۲-۷-۲- تعویض محیط کشت
۳-۷-۲-واکشت
۴-۷-۲- منحنی رشد سلولها
۵-۷-۲-شمارشسلولیوتعییندرصدسلولهایزنده(Viability %)
۱-۵-۷-۲-شمارش سلولیوتعییندرصدسلولهایزنده(Viability %)با تریپان بلو
۲-۵-۷-۲- تعیین درصد سلول های زنده (%viability)به روشMTT
۱-۲-۵-۷-۲- محاسبه تعداد مناسب سلول جهت انجام تست MTT
۲-۲-۵-۷-۲- تست MTT
۶-۷-۲- آماده سازی سلولها و مراحل انجام آزمایش
۷-۷-۲- تعیین درصد زنده بودن سلولها بعد از آزمایش
۸-۷-۲- تعیین میزان لیپید پراکسیداسیون
۸-۲-تعیین میزان گلوتاتیون
۱-۸-۲-گلوتاتیون احیاء
۲-۸-۲-گلوتاتیون تام
۳-۸-۲- رسم منحنی استاندارد
۴-۸-۲- رسم منحنی استاندارد گلوتاتیون
۵-۸-۲- رسم منحنی استاندارد لیپید پراکسیداسیون
۶-۸-۲-اندازه گیری ترکیبات فنولی
۷-۸-۲- محاسبات آماری
فصل سوم: نتایج
۱-۳- نتایج حاصل از آزمایشات انجام شده توسط تست MTT
۱-۱-۳- بررسی سمیت سلولی غلظت های مختلف عصاره آب وهسته یمیوه انار بر رده سلولیHepG2 به روش MTT
۲-۱-۳- بررسی سمیت سلولی غلظت های مختلف CCl4 بر رده سلولیHepG2 به روش MTT
۳-۱-۳- بررسی اثر محافظتی غلظت های مختلف سیلیمارین در مقابل سمیت سلولی CCl4
۴-۱-۳- بررسی اثر عصاره های مختلف آب و هسته انار بر میزان لیپید پراکسیداسیونGSSG , و GSH در سلول های ۲HepG
۵-۱-۳- اندازه گیری ترکیبات فنولی در عصاره های مختلف آب و هسته میوه انار
۱-۳- بررسی اثر محافظتی عصاره هیدروالکلی آب میوه انار بر سمیت سلولی حاصل ازCCl4 بر سلول های HepG2
۲-۳- بررسی اثر محافظتی عصاره هیدروالکلی هسته میوه انار بر سمیت سلولی حاصل ازCCl4 بر سلول های HepG2
۳-۳- بررسی اثر محافظتی عصاره اتیل استاتی آب میوه انار بر سمیت سلولی حاصل ازCCl4 بر سلول های HepG2
۴-۳- بررسی اثر محافظتی عصاره اتیل استاتی هسته میوه انار بر سمیت حاصل ازCCl4 بر سلول های HepG2
۵-۳- بررسی اثر محافظتی عصاره اِن هگزانی آب میوه انار بر سمیت سلولی حاصل ازCCl4 بر سلول های HepG2
۶-۳- بررسی اثر محافظتی عصاره اِن هگزانی هسته میوه انار بر سمیت سلولی حاصل ازCCl4 بر سلول های HepG2
۷-۳-مقایسه اثر محافظتی عصاره هیدروالکلی آب و هسته میوهانار بر سلول های HepG2
فصل چهارم: بحث و نتیجه گیری
۱-۴-بحث و نتیجه گیری
فهرست منابع ومآخذ